CJC-1295 з DAC чи без DAC: у чому різниця й за що ціна

446262-90-4 і 863288-34-0 — це CAS-номери двох різних речовин, які половина каталогів продає під однією назвою. Якщо ви шукаєте CJC-1295 з DAC, а на картці товару стоїть 863288-34-0, у флаконі майже напевно не те, за що ви платите. Різниця між цими молекулами — один амінокислотний залишок, 279 дальтонів маси і приблизно три сотні разів у часі життя в плазмі.

Плутанина не випадкова. Обидві форми виросли з розробок однієї компанії, мають спільну двадцятидев'ятичленну основу, а в публічних хімічних базах їхні синоніми подекуди перемішані — нижче буде конкретний приклад із PubChem. Розберемо, звідки взялася ця пара, що фізично робить DAC і за якими двома числами перевірити товар за хвилину.

Звідки взявся фрагмент 1-29

18 листопада 1982 року Рів'є (Rivier), Шпіс (Spiess), Торнер і Вейл опублікували в Nature характеристику фактора, що вивільняє гормон росту, виділеного з острівцевоклітинної пухлини підшлункової залози людини (т. 300, № 5889, с. 276–278). Через п'ять днів та сама група навела його секвенування в Biochemistry (1982, т. 21, № 24, с. 6037–6040). Так з'явився нативний GHRH — пептид із 44 амінокислот.

Досить швидко стало зрозуміло, що здатність активувати рецептор зосереджена в N-кінцевій частині ланцюга. Практичний висновок був очевидний: якщо перші 29 залишків зберігають активність, решту п'ятнадцять можна не синтезувати. Це менше циклів на смолі, менше сировини й помітно простіше очищення. Фрагмент GHRH(1-29) став каркасом для цілого класу сполук — на ньому побудований і серморелін, і обидві версії CJC-1295.

Чому саме 29 амінокислот, а не 44?

Тому що коротший фрагмент зберігає здатність зв'язувати й активувати рецептор GHRH, а решта ланцюга для цієї функції не потрібна. Стійкості скорочення при цьому не додає: у роботі Фромана (Frohman) зі співавторами (The Journal of Clinical Investigation, 1989, т. 83, с. 1533–1540) GRH(1-44)-NH2, GRH(1-40)-OH, GRH(1-32)-NH2 і GRH(1-29)-NH2 однаково швидко розщеплювалися тими самими плазмовими ферментами. Тобто вибір на користь 29 залишків — рішення виробниче, а не фармакологічне.

Чотири заміни: що саме закриває кожна

Голий GHRH(1-29) непридатний для тривалих експериментів: він зникає з плазми за лічені хвилини. Фроман описав механізм точно. Дипептидилпептидаза-4 розрізає ланцюг рівно між другим і третім залишками, відрізаючи дипептид і перетворюючи молекулу на фрагмент 3-44, який попередня робота тієї ж групи (The Journal of Clinical Investigation, 1986, т. 78, с. 906–913) охарактеризувала як біологічно неактивний продукт. Що це саме DPP-4, автори довели двічі: реакцію зупиняв конкурентний інгібітор діпротин A, а заміна амінокислоти в першому або другому положенні на D-ізомер повністю блокувала гідроліз.

На цьому й побудований модифікований каркас, який у літературі називають Mod GRF 1-29. Чотири заміни щодо нативної послідовності:

• D-Ala у позиції 2 замість природного L-аланіну. Дзеркальний ізомер не читається дипептидилпептидазою-4 — це основний і найважливіший захист;
• Gln у позиції 8 замість аспарагіну. Аспарагін дезамідується через утворення сукцинімідного циклу; Стівенсон (Stevenson) зі співавторами вимірювали швидкість цього процесу для аналогів GRF і показали, що спіральне оточення Asn8 його сповільнює (International Journal of Peptide and Protein Research, 1993, т. 42, № 6, с. 497–503). Глутамін такої вразливості не має взагалі;
• Ala у позиції 15 замість гліцину. Ця заміна стосується не стабільності, а спорідненості: Кемпбелл (Campbell) зі співавторами (Peptides, 1991, т. 12, № 3, с. 569–574) виміряли, що аналоги hGRF(1-29)-NH2 з Ala15 зв'язуються з рецептором GRF у 4–5 разів міцніше за hGRF(1-44)-NH2;
• Leu у позиції 27 замість метіоніну. Метіонін — єдиний легкоокиснюваний залишок у фрагменті, його сірка перетворюється на сульфоксид просто у водному розчині. Лейцин близький за формою й об'ємом, але окисненню не піддається.

Чи захищають ці заміни від трипсину?

Ні, і це поширена помилка в описах товарів. Фроман окремо описав другий шлях деградації — трипсиноподібне розщеплення. Для нативного GRH воно відбувається між 11-м і 12-м залишками, а для вкорочених GRH(1-32) і GRH(1-29) — між 12-м і 13-м. Жодна з чотирьох замін цих позицій не зачіпає: вони сидять у 2, 8, 15 і 27. Внесок трипсиноподібної активності за спостереженнями авторів менший, ніж у DPP-4, але вона нікуди не дівається. Якщо продавець пише, що четверта заміна «дає стійкість до трипсину», він переказує чужий текст, а не джерело.

Що таке DAC і чому він працює

DAC — це Drug Affinity Complex, і технічно це не окрема речовина, а прибудова. До C-кінця Mod GRF 1-29 додають тридцятий залишок: лізин, до бічної аміногрупи якого пришита малеїмідопропіонільна група. Малеїмід — п'ятичленне кільце, яке швидко й практично незворотно реагує з вільними тіольними групами, утворюючи тіоефірний зв'язок.

Далі починається найелегантніша частина задуму. У плазмі крові є білок, у якого рівно одна вільна SH-група — сироватковий альбумін, залишок цистеїн-34. Малеїмід знаходить цю мішень і ковалентно зшиває пептид з альбуміном. Жетте (Jetté) зі співавторами (Endocrinology, 2005, т. 146, с. 3052–3058) синтезували в ConjuChem три малеїмідні похідні hGRF(1-29), кон'югували їх з людським сироватковим альбуміном ex vivo і відібрали найкраще — саме воно отримало код CJC-1295. У статті сполуку описано буквально як тетразаміщену форму hGRF(1-29) з Nε-3-малеїмідопропіонамідним похідним лізину на C-кінці. Кон'югацію автори підтвердили вестерн-блотом: імунореактивна смуга на позиції альбуміну з'являлася через 15 хвилин і трималася понад добу.

Чому час життя в плазмі відрізняється в сотні разів?

Тому що пептид успадковує фармакокінетику носія. Альбумін важить близько 66 кДа — це вище порога клубочкової фільтрації, тож нирки його не виводять. Крім того, рецептор FcRn перехоплює альбумін в ендосомах при кислому pH і повертає назад у кровотік замість лізосомної деградації; завдяки цьому механізму власний час напівжиття альбуміну в людини становить близько 19 діб. Пришитий до нього пептид просто їде тим самим маршрутом. У версії без DAC мова йде про десятки хвилин.

Рівний фон проти короткого піку

Тейхман (Teichman) зі співавторами (The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 2006, т. 91, с. 799–805) провели два рандомізовані плацебо-контрольовані подвійні сліпі дослідження з висхідними дозами на здорових дорослих віком 21–61 рік; тривалість — 28 і 49 діб. Розрахований період напіввиведення CJC-1295 склав 5,8–8,1 доби. Після одноразового підшкірного введення автори спостерігали дозозалежне підвищення середніх концентрацій GH у плазмі в 2–10 разів упродовж шести і більше діб, а IGF-I — у 1,5–3 рази протягом дев'яти-одинадцяти діб; після повторних введень середній рівень IGF-I залишався вищим за початковий до 28 діб. Альба (Alba) зі співавторами (American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism, 2006, т. 291, с. E1290–E1294) описали, що щоденне введення CJC-1295 нормалізувало ріст у мишей із нокаутом гена GHRH, тоді як рідші інтервали працювали гірше.

Тепер порівняйте це з версією без DAC. У тій самій роботі Жетте повідомив, що при підшкірному введенні щурам кон'югат давав чотириразове збільшення площі під кривою GH за двогодинний період порівняно з немодифікованим hGRF(1-29). Немодифікований фрагмент теж працює — але він відпрацьовує і зникає.

Це два різні профілі, а не гірший і кращий. Ендогенна секреція гормону росту імпульсна, і в моделях вимірюють амплітуду та частоту окремих піків. Тривала присутність аналога GHRH цю картину згладжує. Тому форма з DAC придатна для питань про стале тло й повільну динаміку IGF-I, а форма без DAC — для питань про окремий імпульс і його форму. Обрати «сильнішу» тут неможливо, бо вони відповідають на різні запитання.

Яка версія краща — з DAC чи без DAC?

Питання поставлене некоректно, і це найчастіша причина невдалої покупки. Якщо модель вимагає рівного фонового сигналу протягом тижня, потрібен DAC — без нього експеримент просто не відбудеться. Якщо модель вимагає короткого керованого імпульсу, накладеного на природний ритм, DAC цей ритм зруйнує. Правильний порядок дій — спочатку сформулювати, що саме вимірюється, і лише потім дивитися на цінник.

Як відрізнити їх за двома числами

Приємна новина: обидві форми розрізняються приладом однозначно, і вірити продавцю на слово не потрібно. Достатньо звірити CAS-номер на сторінці товару з молекулярною масою в сертифікаті аналізу.

• CJC-1295 з DAC: CAS 446262-90-4, формула C165H269N47O46, молекулярна маса ≈3647,2 г/моль, 30 амінокислот. Той самий набір даних дає запис PubChem CID 91971820. У реєстрі субстанцій FDA сполука має код UNII 62RC32V9N7, а її послідовність записана як YaDAIFTQSYRKVLAQLSARKLLQDILSRK: мала літера позначає D-ізомер у другому положенні, і добре видно Q у восьмому, A у п'ятнадцятому та L у двадцять сьомому, а тридцятий K — це якраз той залишок, що несе DAC;
• CJC-1295 без DAC, він же Mod GRF 1-29: формула C152H252N44O42, молекулярна маса ≈3367,9 г/моль, 29 амінокислот, запис PubChem CID 91976842. З номером тут складніше: у каталогах ходять два — 863288-34-0 (так подає ChemicalBook) і 446036-97-1 (так подають Cayman Chemical, GlpBio, Biosynth). Обидва ведуть до тієї самої формули й тієї самої маси, тож жоден із них сам собою не є ознакою підробки.

Різниця мас — приблизно 279 Да, і це рівно маса доданого лізину з малеїмідопропіонільною групою. У мас-спектрі в сертифікаті вона видна неозброєним оком. Якщо на етикетці написано «з DAC», а в COA стоїть маса близько 3368 — вам продали дешевшу молекулу під дорожчою назвою. Як читати сертифікат рядок за рядком — у матеріалі COA: сертифікат аналізу партії.

Чому взагалі виникла назва «CJC-1295 без DAC»?

Через мовну аварію, і знання її походження рятує від половини помилок. Код CJC-1295 у ConjuChem від початку позначав рівно одну сполуку — ту, що з альбуміновим якорем; так її й названо в заголовку статті Жетте. Двадцятидев'ятичленний каркас без малеїміду мав власне ім'я, Mod GRF 1-29, і окремої абревіатури не потребував.

Назва «CJC-1295 without DAC» — пізніший винахід продавців, ретронім. Коли попит на впізнаваний код виріс, дешевший модифікований GRF почали продавати як «той самий CJC-1295, тільки без DAC», хоча коду CJC-1295 він ніколи не носив. Далі назва відірвалася від джерела й зажила своїм життям: у частині каталогів «CJC-1295» без уточнення означає версію з DAC, у частині — без неї. Звідси й практичне правило: слово «CJC-1295» саме собою не ідентифікує товар.

Який CAS-номер у CJC-1295 з DAC?

446262-90-4. Номери 863288-34-0 і 446036-97-1, які часто підставляють у картки товарів із DAC, належать версії без DAC. Перевіряти варто хоча б тому, що навіть публічні бази тут не бездоганні: у записі PubChem для двадцятидев'ятичленної молекули без DAC (CID 91976842) у списку синонімів одночасно значаться «CJC1295 Without DAC» і «CJC1295 With DAC». Якщо помилка живе в базі, звідки продавці копіюють дані, вона неминуче розповзається каталогами. Тому орієнтуйтеся на зв'язку «CAS + формула + маса», а не на одне число.

Чому версія з DAC дорожча за міліграм

Скажемо прямо: у нашому каталозі — версія з DAC. Станом на дату публікації це 890 грн за флакон 2 мг і 1990 грн за 5 мг, тобто приблизно 445 і 398 грн за міліграм. Для орієнтира: серморелін, тобто немодифікований GHRH(1-29), у тому ж каталозі виходить 229 грн за міліграм у флаконі 10 мг.

Різниця не в націнці, а в кількості роботи. По-перше, тридцять залишків замість двадцяти дев'яти — це додатковий цикл твердофазного синтезу з усіма його стадіями. По-друге, чотири нестандартні заміни вже самі собою дорожчі за звичайні: D-аланін коштує помітно більше за L-форму.

Головне ж — сам малеїмід. Це кільце реактивне не лише до тіолів, а й до амінів, тому його не ведуть через увесь синтез разом із ланцюгом: малеїмідопропіонільну групу приєднують до бічної аміногрупи C-кінцевого лізину окремою стадією з окремим очищенням. Кожна додаткова стадія — це втрати виходу й ще один прогін ВЕРХ. Ціна за міліграм відображає саме це, а не «преміальність» абревіатури.

Скільки коштує CJC-1295 в Україні і на що дивитися?

Порівнювати пропозиції коректно за ціною міліграма, а не за ціною флакона, і лише в межах однієї форми. Дешева пропозиція «CJC-1295» без вказаної форми найчастіше означає Mod GRF 1-29 — і тоді вона взагалі не конкурує з версією з DAC, бо це інший товар. Другий обов'язковий фільтр — наявність COA на конкретну партію з масою в мас-спектрі. Суміжні позиції зібрані в розділі Growth, а комбінація Mod GRF 1-29 із селективним агоністом грелінового рецептора — окремою карткою CJC-1295 + Ipamorelin.

Що саме ви купуєте з погляду статусу

CJC-1295 не зареєстрований як лікарський засіб у жодній юрисдикції. ConjuChem довела сполуку до II фази — саме звідти походять цитовані вище дані Тейхмана, — але програма зупинилася. Дослідження NCT00267527 на пацієнтах із ВІЛ-асоційованим вісцеральним ожирінням має в реєстрі ClinicalTrials.gov статус «terminated»: у липні 2006 року компанія припинила його після смерті учасника, і хоча лікар, який спостерігав випадок, пов'язав подію з наявною коронарною хворобою, а не з досліджуваною сполукою, розробку далі не відновили. Для контрасту: у цьому ж класі є тесаморелін — аналог GHRH, який у листопаді 2010 року отримав схвалення FDA. CJC-1295 — ні.

Практично це означає дві речі. Перша: у молекули немає інструкції із застосування, немає затверджених показань і немає профілю безпеки, зібраного на великій вибірці. Перелік «побічних ефектів» для неї нізвідки взяти — його просто не існує. Друга: GHRH та його аналоги, з CJC-1295 серед прямо названих прикладів, внесені до Забороненого списку WADA у розділі S2, і заборона діє постійно, а не лише в змагальний період.

Polar Peptides продає CJC-1295 з DAC як реактив для лабораторних досліджень. Не як лікарський засіб, не як харчову добавку і не для застосування людьми. Ми не наводимо дозувань, схем і протоколів введення, бо для незареєстрованої сполуки такі рекомендації не мають джерела — будь-яка цифра в подібному тексті була б вигаданою. Те, що ми можемо дати й даємо, — це підтверджена ідентичність партії: CAS, формула, маса в мас-спектрі та чистота за ВЕРХ у сертифікаті аналізу.

І якщо забрати з цієї статті одне речення, нехай це буде таке: перед оплатою звіряйте CAS-номер і молекулярну масу. 446262-90-4 і ≈3647 Да — це DAC. 863288-34-0 або 446036-97-1 і ≈3368 Да — це Mod GRF 1-29. Усе інше в описі товару вторинне.

Матеріал має інформаційний характер. Усі продукти Polar Peptides призначені виключно для лабораторних досліджень і не для споживання людиною, медичного чи діагностичного застосування.